【Sanger法测序的原理是什么】Sanger法测序，又称双脱氧链终止法，是最早用于DNA序列分析的技术之一。该方法由弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年提出，为基因组学的发展奠定了重要基础。其核心原理是利用DNA聚合酶在体外合成与模板互补的DNA链，并通过特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来随机终止链的延伸，从而生成一系列长度不同的DNA片段，最终通过电泳分析确定碱基顺序。
一、Sanger法测序的基本原理总结
Sanger法测序的核心在于“链终止”机制。实验过程中，将含有模板DNA、引物、四种正常脱氧核苷酸（dNTPs）和少量双脱氧核苷酸（ddNTPs）的反应体系分为四组，每组中加入一种特定的ddNTP（如ddATP、ddTTP、ddGTP或ddCTP）。由于ddNTP缺少3'-OH基团，无法形成磷酸二酯键，因此在DNA链延伸过程中，一旦被掺入，就会导致链的终止。
通过电泳分离不同长度的DNA片段，根据片段大小可判断原始DNA序列中的碱基排列。
二、Sanger法测序步骤简要表
| 步骤 | 操作内容 | 目的 |
| 1 | 准备模板DNA和引物 | 提供复制起点 |
| 2 | 加入dNTPs和ddNTPs | 促进链延伸并随机终止 |
| 3 | 加入DNA聚合酶 | 催化链的延伸 |
| 4 | 分四个反应体系 | 每个体系含一种特定的ddNTP |
| 5 | 进行PCR扩增 | 合成大量不同长度的DNA片段 |
| 6 | 进行凝胶电泳 | 分离不同长度的DNA片段 |
| 7 | 读取电泳结果 | 根据片段位置推断碱基序列 |
三、Sanger法的优点与局限性
| 优点 | 局限性 |
| 精度高，适合小片段测序 | 通量低，不适合大规模测序 |
| 技术成熟，易于操作 | 测序长度有限（通常<1000 bp） |
| 结果直观，便于人工分析 | 成本较高，耗时较长 |
四、结语
尽管随着高通量测序技术（如Illumina、PacBio等）的兴起，Sanger法在大规模基因组测序中的应用逐渐减少，但其在小规模测序、验证测序结果以及某些临床检测中仍具有不可替代的作用。理解Sanger法的原理，有助于更深入地掌握DNA测序的基本机制及其在现代分子生物学中的应用价值。