大家好,小金来为大家解答以上的问题。小鼠脾细胞原代培养，细胞原代培养这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧！
1、一、原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
2、二、仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）材料：胎鼠或新生鼠试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒三、操作步骤（一）胰酶消化法1.器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取组织，置平皿中。
3、2.用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
4、3.用手术剪将组织剪成小块（1mm3），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
5、4.视组织块量加入5-6倍体积的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
6、5.加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
7、6.静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
8、7.1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
9、8.加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
10、9.加入培养液1-2ml（视细胞量），血球计数板计数。
11、10.将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
12、细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。
13、（二）组织块直接培养法自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。
14、翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。
15、于37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
16、四、注意事项自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。
17、细胞计数可在有菌环境中进行。
18、2、在超净台中，组织细胞、培养液等不能暴露过久，以免溶液蒸发。
19、3、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞，以防止细菌落入。
20、五、无菌操作的几个注意事项操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。
21、试剂等瓶口也要擦试。
22、2、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
23、3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
24、4、不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
25、5、瓶子开口后要尽量保持45°斜位。
26、6、吸溶液的吸管等不能混用。
27、附：Hank’s液配方：KH2PO4 0.06g，Nacl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml注：Hank’s液可以高压灭菌。
28、4℃下保存。
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